Étude pré-clinique relative à la croissance du cancer du côlon chez l’homme
RCD s.r.o.
Americká 632
252 29 Dobřichovice
No ID : CZ47052511
EFFET DU PRODUIT BIOCOL SUR LA CROISSANCE DU CARCINOME DU CÔLON HUMAIN (LIGNÉE HCT 116) CHEZ LES SOURIS NUDES
Chercheur principal : Dr Pavla Poučková
Expérience supervisée par : Dr Marie Zadinová
Assistance technique : Eleonora Wenclová, Milena Altnerová, Olga Tachecí
Supervisée par : Jiřina Polívková
Rapport élaboré par : Dr Pavla Poučková, Dr Marie Zadinová
Mise en œuvre à RCD s.r.o. du : 09/06/2005 au 18/08/2005
EFFET DU PRODUIT BIOCOL SUR LA CROISSANCE DU CARCINOME DU CÔLON HUMAIN (LIGNÉE HCT 116) CHEZ LES SOURIS NUDES
1. Objectif de l’étude :
L’étude présentée ici avait pour objectif de déterminer l’effet anticancéreux du produit BIOCOL sur la croissance du carcinome du côlon humain (lignée HCT 116) transplanté par voie sous-cutanée (s.c.) dans l’hypoderme de souris nudes.
2. Matériaux et méthodes
2.1. Substance testée :
BIOCOL – la substance a été fournie sous forme de poudre rouge foncé. Elle a été diluée conformément aux instructions fournies par le donneur d’ordre. La solution a été préparée immédiatement avant chaque administration, celle-ci a été diluée avec de l’eau potable et administrée quotidiennement par voie orale (p.o.) à une dose de 250 mg/kg, (5 mg/20 g), dans un volume de 0,2 ml/20 g (10 ml/kg) du poids corporel. Les animaux des groupes témoins ont reçu quotidiennement (p.o.) le même volume d’eau potable (0,2 ml/20 g, 10 ml/kg de poids corporel).
2.2. Lignes tumorales
Une lignée tumorale humaine de carcinome du côlon (HCT-116) a été utilisée dans le cadre de cette expérience et a été essentiellement obtenue auprès de la banque de collecte européenne de cultures cellulaires authentifiées ECACC (European Collection of the Cell Cultures, CAMR, Salisbury, Wiltshire SP4 0JG, Royaume-Uni). Cette lignée tumorale a été multipliée en culture tissulaire et des souris nudes ont été soumises à un traitement s.c. comportant 107 cellules tumorales et 0,1 ml de Matrigel – sur le côté droit de chaque souris.
2.3. Animaux de laboratoire
Des souris nudes femelles de souche CD-1 ont été utilisées dans le cadre de cette expérience ; poids corporel de 18 à 20 g ; total de 32 animaux ; 16 souris expérimentales et 16 souris témoins (fournies par : AnLab s.r.o. Prague). Les souris étaient placées dans des boîtes à flux laminaire KAT-F/SZ-1000 (AnLab s.r.o. Prague), avec une litière stérilisée par radiation (SAWI Research Bedding , AnLab s.r.o. Prague), nourries par l’intermédiaire d’un régime ST-1 stérilisé par radiation (AnLab s.r.o. Prague) et recevaient de l’eau autoclavée ad libitum.
2.4. Procédure expérimentale
Un jour avant de commencer l’administration de la substance thérapeutique BIOCOL (jour 0), du sang a été prélevé sur 3 souris, au niveau du plexus ophtalmique, l’hémogramme ayant été établie. 24 heures après le prélèvement, l’administration par voie orale du produit BIOCOL au CD-1 a débuté et s’est poursuivie pendant 10 jours. Les animaux de laboratoire ont reçu 250 mg/kg du produit BIOCOL par gavage. Le 11e jour, des cellules tumorales ont été inoculées dans le côté droit de la souris nude au nombre de 107/souris. Après l’inoculation des cellules tumorales, le traitement avec le produit BIOCOL s’est poursuivi dans le groupe expérimental. Les souris témoins ont reçu le même volume d’eau potable par gavage pendant la même période. L’expérience s’est achevée le 36e jour après le début de l’administration orale du produit BIOCOL.
Groupe expérimental :
P1 – 16 souris nudes de souche CD-1, s.c. ca côlon - ligne HCT 116 + p.o. 250 mg/kg de substance BIOCOL.
Groupe témoin :
K1 – 16 souris nudes de souche CD-1, s.c. ca côlon – ligne HCT 116 + p.o. eau potable
Les tumeurs en croissance ont été mesurées tous les trois ou quatre jours et leur volume a été calculé à partir de la formule : V= a x b2 x π/6, où a = longueur de la tumeur, b = largeur de la tumeur. Les souris ont également été pesées tous les trois ou quatre jours. L’expérience s’est achevée le 36e jour après le début du traitement.
2.5. Évaluation de l’expérience
L’évaluation de l’expérience a été réalisée par comparaison des courbes de croissance des tumeurs chez les animaux expérimentaux par rapport aux animaux témoins. Au cours de l’expérience et à la fin de celle-ci – le pourcentage d’inhibition de la croissance tumorale - %TGI (inhibition de la croissance tumorale) – a été calculé sur la base du volume moyen des tumeurs (%TGI = (1 -(volume moyen des tumeurs dans le groupe expérimental/volume moyen des tumeurs dans le groupe témoin)) x 100). Les résultats obtenus ont été évalués statistiquement par le test t bilatéral non paramétrique de Student. Au cours de l’expérience et à la fin de celle-ci, une documentation photographique de l’efficacité de la thérapie a été fournie en comparaison avec le groupe témoin.
3. Résultats et discussion
Les résultats sont récapitulés dans les tableaux 1 à 11 et les graphiques 1 à 9.
Groupe expérimental : 16 souris nudes de souche CD-1, s.c. ca côlon – ligne HCT 116 + p.o. 250 mg/kg de substance BIOCOL
Groupe témoin : 16 souris nudes de souche CD-1, s.c. ca côlon – lignée HCT 116 + eau potable.
Le produit BIOCOL, administré pendant 10 jours avant l’inoculation s.c. de cellules tumorales et ensuite quotidiennement après cette inoculation, a prolongé de manière significativement statistique la période de latence de croissance du c.a. côlon (HCT 116) chez les souris nudes expérimentales, en moyenne de 7,93 jours à 18,56 jours (de 74 %), soit à 174,6 %, par rapport au groupe témoin – non traité, dans lequel la croissance de la tumeur a été observée après 10,63 jours (100 %) (Tableaux 1, 2, graphiques 1, 2).
Le produit BIOCOL a partiellement inhibé la croissance du carcinome du côlon humain (lignée HCT-116) sur les souris nudes. L’inhibition obtenue a été statistiquement significative du 18e au 36e jour de l’expérience, à un niveau de signification de 1 %. Le pourcentage d’inhibition de la croissance tumorale obtenu par rapport au groupe témoin (%TGI) était de 64,4 % au 18e jour de l’expérience, 56,1 % au 22e jour de l’expérience, 53,8 % au 25e jour de l’expérience, 47,04 % au 29e jour de l’expérience, 39,53 % au 32e jour de l’expérience et 31,61 % au 36e jour de l’expérience. (Tableaux 3, 4, 5, 6, 7, graphiques 3, 4, 5, 6)
En ce qui concerne les effets du produit BIOCOL sur le poids corporel des souris nues, la dose de 250 mg/kg a entraîné une diminution du poids corporel chez les souris nudes expérimentales et également une coloration rose à rouge de la peau des souris nudes après la cinquième semaine d’administration. La diminution du poids corporel des souris nudes a été statistiquement significative à un niveau de 1 % du 11e au 36e jour de la thérapie (tableaux 8, 9,10, 11, graphiques 7, 8,9).
D’après les résultats, il est évident que le produit BIOCOL a partiellement inhibé la croissance du carcinome du côlon humain chez les souris nudes, et que l’effet de l’administration préventive du produit dès le premier jour de l’expérience, avant la transplantation de cellules tumorales, a été particulièrement bénéfique. Avec l’augmentation de la durée d’administration du produit, le pourcentage d’inhibition de la croissance tumorale a diminué progressivement. Quant à l’aspect général des souris, nous supposons qu’un surdosage du produit administré s’est produit (voir la photo).
4. Conclusions
- L’administration préventive du produit BIOCOL pendant 10 jours avant l’inoculation sous-cutanée de cellules tumorales (avec administration quotidienne ultérieure après l’inoculation), a prolongé de manière statistiquement significative la période de latence de la croissance s. c. du carcinome du côlon (lignée HCT-116) chez les souris nudes du groupe expérimental par rapport au groupe témoin et ce, de 74 %. (soit 7,93 jours).
- Le produit BIOCOL a exercé un effet inhibiteur statistiquement significatif sur la croissance s. c. du carcinome du côlon humain (lignée HCT-116) chez les souris nudes de la souche CD-I. Au 18e jour de l’expérience, une inhibition de la croissance tumorale de 64,4 % a été obtenue par rapport aux témoins.
- Avec l’augmentation du temps d’administration du produit BIOCOL, le pourcentage d’inhibition de la croissance tumorale a été progressivement réduit. Au 36e jour, il a été constaté une inhibition de la croissance tumorale de 31,61 % par rapport au groupe témoin.
- Le produit BIOCOL, à raison d’une dose orale quotidienne de 250 mg/kg, a réduit de manière statistiquement significative le poids corporel chez les souris expérimentales.
À Prague, le 15/09/2005
Dr Pavla Poučková
